求原核表达详细步骤

基本步骤：

目的基因的扩增、载体与目的基因双酶切、电泳、割胶回收、目的基因与载体的连接反应、重组体筛选、验证重组体、转化入大肠杆菌进行表达。

问题在于：目的基因如何获取，扩增策略的决定，表达载体的选择，双酶切选择哪一对限制性内切酶，如何筛选重组体等等。